酶免疫技术常用的底物是检验职称考试会涉及的内容,为了帮助各位考生了解,华宇医药职称考试网为大家搜集整理如下:
1.HRP的底物 作为供氢体的底物化合物较多,常用的有以下几种:
(1)邻苯二胺(OPD):OPD被认为是HRP为敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下显橙黄色,加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色,大吸收峰在492nm波长。OPD是ELISA中应用早的底物,但其应用液稳定性差,易变色,需新配制后在1小时内使用,显色反应过程需避光,而且具有致癌性。
(2)四甲基联苯胺(TMB):TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色,加入硫酸终止反应后变为黄色,大吸收峰波长为450nm。TMB具有稳定性好,成色无需避光,无致突变作用等优点,已成为目前ELISA中应用广泛的底物。缺点是水溶性差。
(3)其他:5-氨基水杨酸(5-ASA)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)也是HRP常用的底物。
2.AP的底物 常用对-硝基苯磷酸脂(p-NPP),p-NPP经AP作用后的产物为黄色对硝基酚,大吸收峰波长为405nm。
3. β-半乳糖苷酶(β-Gal)的底物 常用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU),酶作用后,生成高强度荧光物4-甲基伞形酮(4-MU),其敏度性较HRP高30~50倍,但测量时需用荧光计。
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