用考马斯亮蓝染蛋白胶方法4%浓缩胶的配制方法

用考马斯亮蓝染蛋白胶方式？

马斯亮蓝染色是用考马斯亮蓝进行蛋白质染色的方式。

1 电泳结束后， 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，保证染色液可以充分覆盖凝 胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时 间。 注：详细的染色时间主要还是看凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚， 温度很低，则染色时间宜一定程度上延长。凝胶较薄，温度非常高，则染色时 间可以一定程度上缩短。一般染色至凝胶的颜色和染色液的颜色很接近， 在染色液中基本上看不清凝胶时，可以觉得已染色充分。染色2-4 个小 时或更长时间不会对后的染色效果出现不好的错误影响。

2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3 次。

3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，保证脱色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。这个时间段更改替换脱色液2-4 次，直至蓝色背景差不多都被脱去，还蛋白条带染 色效果达到预期。一般蛋白条带在脱色1-2 小时后就可以产生。

4%浓缩胶的配制方式？

1．1.5mo1／L Tris-HCl pH 8.8 (已加SDS )

2．0.5mo1／L Tris-HCl pH 6.8 (已加SDS)

3．10％SDS

4．30％Acr／Bis 29.2g Acr + 0.8gBis，用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放。

5．10％Ap (-20℃存放)

6．2x样品缓冲液

0.5mo1／L Tris-HCl pH6.8 2mL

甘油 2mL

20％SDS 2mL

0.1％溴酚蓝 0.5mL

2—β—巯基乙醇 l.0mL

双蒸水 2.5mL

7．5x电极缓冲液

Tris 7.5g

G1y 36 g

SDS 2.5g

双蒸水溶解，定容至500mL，使耗费时长稀释5倍使用

8．染色液：0.2g考马斯亮蓝R250 + 84mL 95％乙醇 + 20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用。

9．脱色液： 酒精：冰醋酸：水＝7.5：7.5：85

1．1.5mo1／L Tris-HCl pH 8.8 (已加SDS )

2．0.5mo1／L Tris-HCl pH 6.8 (已加SDS)

3．10％SDS

4．30％Acr／Bis 29.2g Acr + 0.8gBis，用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放。

5．10％Ap (-20℃存放)

6．2x样品缓冲液

0.5mo1／L Tris-HCl pH6.8 2mL

甘油 2mL

20％SDS 2mL

0.1％溴酚蓝0.5mL

2—β—巯基乙醇 l.0mL

双蒸水 2.5mL

7．5x电极缓冲液

Tris 7.5g

G1y 36 g

SDS 2.5g

双蒸水溶解，定容至500mL，使耗费时长稀释5倍使用

8．染色液：0.2g考马斯亮蓝R250 + 84mL 95％乙醇 + 20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用。

9．脱色液： 酒精：冰醋酸：水＝7.5：7.5：85

醋酸脱色原理？

氨基黑10B使用醋酸来脱色的原理是什么？氨基黑10B - 用途说明

主要用于对聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶和硝酸纤维素膜上蛋白质的染色。在电泳后，推荐固定蛋白质在胶上。 胶用 0.1% 氨基黑10B的7% (v/v) 醋酸溶液染至少2 小时，然后用7% (v/v) 醋酸溶液脱色。检测灵敏度大约是考马斯亮蓝R250的百分之20。

贮存运输：易吸潮密封保存

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