考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到哪些仪器，表面活性剂sds是什么

考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到什么仪器？

蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，以此改变这些染料的光吸收。

在些基础上发展了蛋白质染色测定方式。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。现在广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内满足比尔定律，可以在595nm处比色测定。2—5分钟即呈大光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内都可以。该法操作简单方便快速，消耗样品量少，但不一样蛋白质当中差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

sds表面活性剂怎么配？

百分之10sds表面活性剂的配法:大多数情况下SDS溶液是质量体积比（w/v），百分之10就是10克的SDS粉末溶解在水里，定容到100毫升。

十二烷基硫酸钠-Sodium dodecyl sulfate（SDS）是一种有机物，化学式为C12H25SO4Na，白色或淡黄色粉末，溶于水，对碱和硬水不敏感。具有去污、乳化和优异的发泡力是一种对人体微毒的阴离子表面活性剂，其生物降解度百分之90。

实验材料

(一)试剂

1、百分之30丙烯酰胺混合液(Acr:Bis 为 29:1) 称取丙烯酰胺(Acr ) 29g 及甲叉丙烯酰胺(Bis ) 1.0g ,用 去离子水溶解并稀释至 100ml ,贮棕色瓶中于 4℃保存,可用30天。

2、1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液 取 1mol/L HCL溶液 48ml 、三羟甲基甲烷(Tris ) 36.6g ,加双蒸馏水 至 80ml 使其溶解,调 pH 至 8.8,然后用双蒸馏水稀释至 100ml ,置棕色瓶中, 4℃贮存。

3、1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液 取 1mol/L HCL溶液 48ml , Tris5.98g , 加双蒸馏水至 80ml , 调 pH6.8, 用双蒸馏水稀释至 100ml ,置棕色瓶中, 4℃贮存。

4、Tris-甘氨酸电泳缓冲液 称取 Tris 6g、 甘氨酸 28.8g , 加蒸馏水 850ml , 调 pH 至 8.3, 加蒸馏水到 1000ml , 4℃贮存。耗费时长可做 10倍稀释。

5、百分之10 过硫酸铵(AP )(6)四甲基乙二胺(TEMED )或 β-二甲基氨基丙腈(DMAPN )。

6、百分之10SDS(十二烷基磺酸钠) 称取 SDS 10g,加蒸馏水 100ml 使其溶解。

7、四甲基乙二胺(TEMED )

8、上样缓冲液 取 1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液 6.25ml ,蔗糖 10g , SDS 2.3g, 1g/L溴酚蓝 10ml ,加 蒸馏水溶解,混合至 100ml。

9、考马斯亮蓝染色试剂 考马斯亮蓝 R250染色液:浓度为 2.5g/L,用甲醇∶醋酸∶蒸馏水 =5∶ 1∶ 5的溶 液配制(V/V)。

10、脱色液:取冰醋酸 7.5ml 、甲醇 5ml ,加蒸馏水至 100ml。

11、蛋白质分子量标志物 市售中分子量蛋白质分子量标志物。也可以选择 5种以上的已知分子量蛋白质自 行配制,注意其分子量分布要能满足需,各自不同的蛋白质的浓度基本相等。

电泳法分离混合蛋白质的基本原理是什么？

电泳法分离混合蛋白质的基本原理是按照蛋白质的电荷不一样即酸碱性质不一样分离蛋白质混合物的方式。

电泳法分离混合蛋白质的基本原理是按照蛋白质的电荷不一样即酸碱性质不一样分离蛋白质混合物的方式。

电泳：在外电场的作用下，带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动，这样的情况称为电泳。电泳技术可用于氨基酸、肽、蛋白质和核苷酸等生物分子的分析分离和制备。 区带电泳是因为在支持物上电泳蛋白质混合物被分离为若干区带。

电泳前用缓冲液浸润薄膜或滤纸等支持物或用缓冲液直接配置成凝胶，将待分离的蛋白质样品加在它的一端或中央，支持物的两端与电极连接，通电电泳。电泳结束，各个组分分布在不一样的区域，用显色剂（蛋白质可用考马斯亮蓝或氨基黑等染色）显色后可以显示出各个组分。

氨基酸混合物非常是寡聚核苷酸混合物一次电泳时常不可以完全分开。这样的情况可以将首次电泳分开的斑点通过支持介质间的接触印迹转移到第二个支持介质上，旋转90°，进行第二次电泳。这样的方式称为双向电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳：以聚丙烯酰胺凝胶为支持物，大多数情况下制成凝胶柱或凝胶板，凝胶是由相连的2个部分组成（小的部分是浓缩胶，大的部分为分离胶），这2个部分凝胶的浓度、缓冲液组分和离子强度、pH还有电场强度都不一样的，即不连续性。电泳时样品第一在不连续的两相间积聚浓缩而成很薄的开始区带，然后再进行电泳分离。

电泳有三种物理效应：1、样品的浓度效应；2、凝胶对被分离分子的筛选效应；3、大多数情况下电泳分离的电荷效应。

毛细管电泳：高效毛细管电泳、毛细管区带电泳、自由溶液毛细管电泳、毛细管电泳，可分离氨基酸、肽、蛋白质、DNA片段和核酸还有各种小分子，也可以用于手性化合物的分离。

等点集中（IEF）分离蛋白质混合物是在具有pH梯度的介质（如浓蔗糖溶液）中进行。在外电场作用下各自不同的蛋白质将移向并集中在等于其等电点的梯度处，并形成一个很窄的区带。

pH梯度制作大多数情况下利用两性电解质，它是脂肪族多胺和多羧类的同系物，它们具有相近但不一样的解离常数和等电点。在外电场作用下，自然形成pH梯度。

层析集中：按照蛋白质的等电点差异分离蛋白质混合物的柱层析方式。

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