考马斯亮蓝法与蛋白反应条件，考马斯亮蓝有几种类型,分别有何用途

考马斯亮蓝法与蛋白反应条件？

在酸性的反应条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，致使大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以按照标准曲线而确定。

故此，考马斯亮蓝法测定蛋白质的条件是在酸性条件下。

考马斯亮蓝有几种类型？

蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，以此改变这些染料的光吸收。

在些基础上发展了蛋白质染色测定方式。

涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。

现在广泛使用的染料是考马斯亮蓝。

考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内满足比尔定律，可以在595nm处比色测定。

2—5分钟即呈大光吸收，至少稳定1小时。

在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内都可以。

该法操作简单方便快速，消耗样品量少，但不一样蛋白质当中差异大，且标准曲线线性差。

高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。

缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。

考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

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