ponceau染色法，丽春红染液使用

ponceau染色法？

丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可与蛋白的非极性区相结合，以此形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。

丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它一定程度上溶液洗去。因为这个原因，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目标条带切下用于测序。

注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。

使用说明

将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它一定程度上溶液漂洗2-3次，可产生清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它一定程度上溶液漂洗2-3次，每一次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。

补充：丽春红染色液也可直接用来染PAGE胶，不过，在染色以前好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。

丽春红染色液的配制

经常会用到的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方式请看下方具体内容：

一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH 2 O。

4 ℃保存，不要冻上。也可配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH 2 O”。

二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% （w/v）丽春红，百分之30的三氯乙酸，百分之30的5-磺基水杨酸。

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