考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定，考马斯亮蓝g250法测定蛋白质含量的

考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定？

用考马斯亮蓝法时，稀释蛋白的倍数主要主要还是看标准曲线的情况。 例如用BSA作标准曲线，第一个点加入0.02mg/ml的BSA，其后依次增多为0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml。既然如此那，需测定的蛋白质还要稀释到浓度在0.02~0.1mg/ml当中。

考马斯亮蓝g-250法测定蛋白质含量的优势？

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝反应情况？

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

假设不是为了让用蒸馏水，可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应，这样制作的标准曲线会比实质上值偏高，致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。

蛋白质染色的几种方式？

蛋白质它可以跟不少试剂出现颜色的反应．比如在鸡蛋白溶液中滴入一滴的浓硝酸,则鸡蛋白溶液会呈黄色的，这个原理是因为蛋白质（含苯环结构）与浓硝酸出现了颜色反应.还它还可以用双缩脲试剂对其进行检验,该试剂遇蛋白质变紫的。

经常会用到的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

这当中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现在将其与其他的蛋白质染色方式(主要是银染法)作一比较，帮各位考生更好地去选择适合的蛋白质染色方式。

蛋白质的染色经常会用到的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

这当中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliant blue，CBB)为代表，在蛋白质分析中经常会用到，但对低丰度蛋白质的显现较差;银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容;荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱，但因为需配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常见方式使用;而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。

因为这个原因，筛选简单方便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。

因为考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近几年来就考马斯亮蓝染色法在提升其灵敏性方面研究者们作了不少改进，方式很多，评价不一。

我们在作双向凝胶电泳时，将经常会用到的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响原因作出分析。……具体资料请参考：on http://www.bio1000.com/experiment/protein/351913.html

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