可溶性蛋白的分析方法，folin酚法和考马斯亮蓝法的优缺点-华宇考试网

可溶性蛋白的分析方式？

经常会用到测定方式有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。

folin酚法与考马斯亮蓝法和紫外吸收法的优缺点？

1．蛋白质测定的Folin-酚比色法（即Lowry法）的定量范围为5～100μg蛋白质，灵敏度高；但操作要费较长时间，且Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸导致，因为这个原因样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用；不一样蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不一样而使显色强度也稍有不一样。紫外吸收法测蛋白质含量快速、简单方便、不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。

但该法的缺点是：

（1）针对测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异很大的蛋白质，有一定的误差。故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。

（2）若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，出现很大干扰。

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式有哪些优点？

　　考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：　　

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；　　

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。　　

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。　　考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

lowry法是什么？

Lowry 法指的是在双缩脲法的基础上通过添加福林一酚试剂来增多蛋白质的分析灵敏度，可以适用于双缩脲法没办法测定的低蛋白含量样品。此反应中，福林酚试剂被蛋白质中的酪氨酸残基还原，形成的蓝色化合物在750 nm、405 nm 附近有大吸收。

其原理是蛋白质与碱性铜溶液中的铜离子络合，让肽键伸展，以此使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，出现蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，因为各自不同的蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不一样，因为这个原因在测定时需使用同种蛋白质作标准。

　　bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。　　bradford法，也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者大光吸收在 465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～100μg/ml)，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速，其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应很灵敏，可测微克级蛋白质含量，故此，是一种很好的蛋白质定量法。　　Lowry法是双缩脲法和福林酚法的结合与发展，其原理是：蛋白质溶液用碱性铜溶液处理，形成铜-蛋白质的络合盐，再加入酚试剂后，除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外，还使双缩脲法中肽键、碱性铜的显色效果更强烈。因为这个原因，Lowry法的显色效果比独自使用酚试剂强烈3～15倍，为双缩脲法100 倍。因为肽键显色效果提高，以此减小了因蛋白质种类导致的偏差。Lowry法的试剂由2个部分组成，试剂甲基本上等同于双缩脲试剂(碱性铜溶液)，可与蛋白质中的肽键起显色反应；试剂乙为磷钨酸和磷钼酸混合液，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物而呈蓝色反应，因为这个原因蛋白质的酪氨酸和胱氨酸等可显色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。