什么是考马斯亮蓝法（Bradford法），考马斯亮蓝反应现象解释-华宇考试网

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什么是考马斯亮蓝法（Bradford法）？

bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

考马斯亮蓝反应情况？

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

假设不是为了让用蒸馏水，可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应，这样制作的标准曲线会比实质上值偏高，致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。

lowry法是什么？

Lowry 法指的是在双缩脲法的基础上通过添加福林一酚试剂来增多蛋白质的分析灵敏度，可以适用于双缩脲法没办法测定的低蛋白含量样品。此反应中，福林酚试剂被蛋白质中的酪氨酸残基还原，形成的蓝色化合物在750 nm、405 nm 附近有大吸收。

其原理是蛋白质与碱性铜溶液中的铜离子络合，让肽键伸展，以此使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，出现蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，因为各自不同的蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不一样，因为这个原因在测定时需使用同种蛋白质作标准。

　　bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。　　bradford法，也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者大光吸收在 465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～100μg/ml)，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速，其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应很灵敏，可测微克级蛋白质含量，故此，是一种很好的蛋白质定量法。　　Lowry法是双缩脲法和福林酚法的结合与发展，其原理是：蛋白质溶液用碱性铜溶液处理，形成铜-蛋白质的络合盐，再加入酚试剂后，除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外，还使双缩脲法中肽键、碱性铜的显色效果更强烈。因为这个原因，Lowry法的显色效果比独自使用酚试剂强烈3～15倍，为双缩脲法100 倍。因为肽键显色效果提高，以此减小了因蛋白质种类导致的偏差。Lowry法的试剂由2个部分组成，试剂甲基本上等同于双缩脲试剂(碱性铜溶液)，可与蛋白质中的肽键起显色反应；试剂乙为磷钨酸和磷钼酸混合液，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物而呈蓝色反应，因为这个原因蛋白质的酪氨酸和胱氨酸等可显色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。