亮蓝大吸收波长，双氧水使蛋白质变性原理

亮蓝大吸收波长？

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488 nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595 nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；其结合物在室温下1h内保持稳定。

考马斯亮蓝显色法测定植物蛋白质含量，显色反应灵敏，大吸收波长是595nm，而考马斯亮蓝的大吸收波长是488nm，不干扰测定结果

双氧水使蛋白质变性后，加考马斯亮蓝测样品中蛋白含量会不会有影响？

有影响 考马斯亮蓝测定蛋白质的原理：考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者大光吸收在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0～100μg/ml），蛋白质－色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。当用双氧水作用蛋白质后，蛋白质结构会出现变化，致使疏水区的外漏，原来的水化膜被破坏，这样再加入考马斯亮蓝，他与蛋白质的结合位点增多，会使测定值偏大，不可以正确测出蛋白质的浓度了。

712型分光光度计使用原理？

分光光度计原理：

分光光度计采取一个可以出现多个波长的光源，通过系列分光装置，以此出现特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，以此转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

分光光度计组成：主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

分光光度定义：

分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。

经常会用到的波长范围：

（1）200～400nm的紫外光区

（2）400～760nm的可见光区

（3）2.5～25μm（按波数计为4000cm-1～400cm-1）的红外光区

所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，全部仪器应根据国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

分光光度计的重要配件- 比色杯

比色杯根据材质总体分为石英杯、玻璃杯还有塑料杯。按照不一样的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。大多数情况下测试核酸和紫外定量蛋白，均采取石英杯或者玻璃杯，但是，不合适比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，故此，一定要采取一次性的塑料杯。而塑料杯大多数情况下不合适用于在紫外范围内测试样品。

分光光度计操作方式：

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较）。

3.按照所需波长转动波长选择钮。

4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后一步一步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色结束，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

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