R250不可以用来测蛋白质浓度的,G250用来测蛋白质浓度100mg考马斯亮蓝G-250溶于50 ml 95%乙醇,加入100 ml磷酸然后补加水至1 L,Whatman1号滤纸过滤。
用考马斯亮蓝法时,稀释蛋白的倍数主要主要还是看标准曲线的情况。 例如用BSA作标准曲线,第一个点加入0.02mg/ml的BSA,其后依次增多为0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml。既然如此那,需测定的蛋白质还要稀释到浓度在0.02~0.1mg/ml当中。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水低要求是蒸馏水,更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制,标准曲线的制作都要用到水。
假设不是为了让用蒸馏水,可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质,会影响试剂配制的准确性,干扰实验结果。
而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应,这样制作的标准曲线会比实质上值偏高,致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。
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