用考马斯亮蓝法时,稀释蛋白的倍数主要主要还是看标准曲线的情况。 例如用BSA作标准曲线,第一个点加入0.02mg/ml的BSA,其后依次增多为0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml。既然如此那,需测定的蛋白质还要稀释到浓度在0.02~0.1mg/ml当中。
考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是:
1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡,完成反应十分快速;
2.其结合物在室温下1h内保持稳定。
3.该法试剂配制简单,操作简单方便快捷,反应很灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。
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