第一关掉电源。电泳指的是带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动的情况。电泳结束时应先关掉电源。然后再取出玻璃板,取胶时动作要轻。使用考马斯亮蓝染液染色时可以在摇床上染色过夜,也可以在微波炉中加热煮沸进行染色。
电泳结束,应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头。
取出电泳板,进行染色或其他处理。电泳仪的使用方式需了解详细实验要求和设备操作手册,避免产生操作失误和安全问题。
电泳法分离混合蛋白质的基本原理是按照蛋白质的电荷不一样即酸碱性质不一样分离蛋白质混合物的方式。
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电泳:在外电场的作用下,带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动,这样的情况称为电泳。电泳技术可用于氨基酸、肽、蛋白质和核苷酸等生物分子的分析分离和制备。 区带电泳是因为在支持物上电泳蛋白质混合物被分离为若干区带。
电泳前用缓冲液浸润薄膜或滤纸等支持物或用缓冲液直接配置成凝胶,将待分离的蛋白质样品加在它的一端或中央,支持物的两端与电极连接,通电电泳。电泳结束,各个组分分布在不一样的区域,用显色剂(蛋白质可用考马斯亮蓝或氨基黑等染色)显色后可以显示出各个组分。
氨基酸混合物尤其是寡聚核苷酸混合物一次电泳时常不可以完全分开。这样的情况可以将首次电泳分开的斑点通过支持介质间的接触印迹转移到第二个支持介质上,旋转90°,进行第二次电泳。这样的方式称为双向电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳:以聚丙烯酰胺凝胶为支持物,大多数情况下制成凝胶柱或凝胶板,凝胶是由相连的2个部分组成(小的部分是浓缩胶,大的部分为分离胶),这2个部分凝胶的浓度、缓冲液组分和离子强度、pH还有电场强度都不一样的,即不连续性。电泳时样品第一在不连续的两相间积聚浓缩而成很薄的开始区带,然后再进行电泳分离。
电泳有三种物理效应:1、样品的浓度效应;2、凝胶对被分离分子的筛选效应;3、大多数情况下电泳分离的电荷效应。
毛细管电泳:高效毛细管电泳、毛细管区带电泳、自由溶液毛细管电泳、毛细管电泳,可分离氨基酸、肽、蛋白质、DNA片段和核酸还有各种小分子,也可以用于手性化合物的分离。
等点集中(IEF)分离蛋白质混合物是在具有pH梯度的介质(如浓蔗糖溶液)中进行。在外电场作用下各自不同的蛋白质将移向并集中在等于其等电点的梯度处,并形成一个很窄的区带。
pH梯度制作大多数情况下利用两性电解质,它是脂肪族多胺和多羧类的同系物,它们具有相近但不一样的解离常数和等电点。在外电场作用下,自然形成pH梯度。
层析集中:按照蛋白质的等电点差异分离蛋白质混合物的柱层析方式。
以上就是本文电泳结束后的操作顺序,试述电泳分离混合组分的原理的全部内容
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