考马斯亮蓝有毒吗，考马斯亮蓝g250法测定蛋白质含量的优缺点

考马斯亮蓝有毒吗？

有毒。

考马斯亮蓝属于三苯甲烷类染料,可与蛋白质形成很强的非共价复合体.考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量成正比。

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考马斯亮蓝为一种三苯甲烷类染料，可与蛋白质通过范德华力作用形成很强的非共价复合体。考马斯亮蓝染色法以非常高的重复性和灵敏度还有很好的质谱兼容性，成为现在一种使用较为广泛的蛋白质染色方式，其在一定范围内和蛋白浓度呈正比，因为这个原因也用于蛋白定量检测

考马斯亮蓝g-250法测定蛋白质含量的优势？

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝g-250溶液的配制？

考马斯亮蓝G-250的配制：

1.称取100 mg考马斯亮蓝G-250，溶于50 mL 百分之90乙醇中，

2.加入85%的磷酸100 mL，

3.后用蒸馏水定容到1 000 mL。 此溶液在常温下可放置30天。

考马斯吸光度适用范围

考马斯亮蓝显色法的基本原理是按照蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后，其对可见光的大吸收峰从 465nm 变为 595nm。

在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下，当溶液中的蛋白质浓度不一样时，就可以有不一样量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为 465nm 的形式转变成吸收峰为 595nm 的形式，而且，这样的转变有一定的数量关系。

大多数情况下情况，当溶液中的蛋白质浓度增多时，显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增多，因为这个原因可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。

考马斯亮蓝洗脱液配方？

0.25% 考马斯亮蓝R-250 ：100ml

甲醇： 45ml

蒸馏水： 45ml

冰乙酸： 10ml

考马斯： 0.25g

考马斯亮蓝脱色液：1L

乙醇： 50ml

冰乙酸： 100ml

蒸馏水： 850m

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