考马斯吸光度适用范围，考马斯亮蓝法与蛋白质反应

考马斯吸光度适用范围

考马斯亮蓝显色法的基本原理是按照蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后，其对可见光的大吸收峰从 465nm 变为 595nm。

在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下，当溶液中的蛋白质浓度不一样时，就可以有不一样量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为 465nm 的形式转变成吸收峰为 595nm 的形式，而且，这样的转变有一定的数量关系。

大多数情况下情况，当溶液中的蛋白质浓度增多时，显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增多，因为这个原因可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。

考马斯亮蓝法与蛋白反应条件？

在酸性的反应条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，致使大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以按照标准曲线而确定。

故此，考马斯亮蓝法测定蛋白质的条件是在酸性条件下。

蛋白的纯度怎么计算？

你想：启动的浓度假设是xug/mL既然如此那，取了1ml蛋白质溶液，稀释到了100ml，则浓度为x/100ug/mL再取0.6mL,加入0.4ml蒸馏水和5ml考马斯后，浓度为x/100*0.6/6故x/100*0.6/6=12.777既然如此那，x=12.777*100*6/0.6ug/mL

考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量时，如何不要测定中产生误差，不要样品的OD值低于空白对照的情况出现？

考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较经常会用到的方式，误差可尽可能减到小，需注意：测定OD值前，将分光光度计早一点预热至少30分钟，可保证准确性；配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用；盐离子不影响实验结果，但去污剂，如TRITONX-100，SDS等，会严重干扰实验结果。

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