做豆腐的怎样知道大豆蛋白，胶内酶解的原理

做豆腐的怎样清楚大豆蛋白？

1、可以用等电点法、盐析法、有机溶剂的分级沉淀法来提取。

2、用考马斯亮蓝结合法测定它们的纯度高低。

3、低温脱脂豆粕的加工方式有两种：一种是丁烷亚临界低温萃取，一种是6号溶剂低温浸出（A、B筒或闪蒸法）。大豆通过低温浸出脱脂后脱脂豆粕，其蛋白含量可达到百分之50以上。

4、大豆是蛋白质含量高、氨基酸组成合理的农作物.大豆蛋白质含量范围在35-百分之50当中,平均蛋白含量在百分之40左右,其蛋白质组成分别是63%球蛋白,12%白蛋白,3%醇溶蛋白和7%谷蛋白。

5、大豆蛋白质约占大豆含量的百分之40是谷类食物的4~5倍。除蛋氨酸 ，在营养价值上与动物蛋白相当。

6、大豆蛋白经分离提取后，这当中氨基酸的成分与含量比联合国粮农组织及世界卫生组织推荐的儿童及成年人氨基酸营养素供给量标准（RDA）还需要高不少，消化吸收率得到很大提升是不可多得的高质量蛋白质。

7、大豆分离蛋白粉去除了大豆中原有的营养抑制因子-胰蛋白酶抑制剂，这样就不会有消化不良、胃胀气等不适反应了。

1、食物缺点：

（1）大豆蛋白也有缺点。怕高温，有异味。大豆蛋白的食用温度好不要用开水，100℃开水会破坏大豆蛋白的结构，会降低营养价值。

（2）大豆蛋白中含有大豆异黄酮等物质，使大豆蛋白具有一定的腥味。大豆蛋白含有高嘌呤，不建议中老年人食用。

（3）建议：水温50-60℃，糖分消耗量为糖尿病。

2、营养功能：

（1）大豆含有丰富的蛋白质，其含量是小麦、水稻和其他谷物的两倍多，一般在百分之40到百分之50当中。贮藏蛋白是大豆蛋白的主体，占总蛋白的百分之70以上，主要涵盖7s球蛋白（大豆球蛋白）和11s球蛋白（大豆球蛋白），其他贮藏蛋白如2s、9s、15s等较少。

（2）大豆蛋白不仅含有贮藏蛋白，还含有β-淀粉酶、细胞色素c、植物血凝素、脂质氧化酶、脲酶、kunitz胰蛋白酶抑制剂和bowman-birk胰蛋白酶抑制剂等生物活性蛋白。一般，为了提升大豆制品的消化率，这些抑制剂在加工途中被去除或用特殊方式灭活。

（3）除开这点市场上的大豆蛋白产品中，一般还含有异黄酮、皂甙、卵磷脂等物质。

（4）在氨基酸含量方面，大豆蛋白是唯一一种含有9种必需氨基酸、满足人类需的植物蛋白。它被觉得是一种全价蛋白质。

（5）其蛋白质评价指标pdcaas（protein digestibility corre

胶内酶解原理？

5. 酶解 a) 按照胶粒大小,加入适合体积的胰蛋白酶工作液(浓度 10ng/uL),以完全盖住胶 粒为准,冰浴 45min,使胶粒充分吸收酶解液

蛋白质组学中蛋白样品的酶解方式-胶内酶解

1.蛋白样品进行凝胶电泳后，用刀片切下胶上目标胶点，置于EP管中。

2.用超纯水洗胶块，然后振荡1 min，放置5-10 min 洗去胶上的杂质。然后倒出液体，再加超纯水重复洗一遍，吸水纸吸去液体。

3. ⑴银染脱色：脱色液配制：30 mmol/L K3Fe(CN)6 : 100 mmol/LNa2S2O3=1:1，用前新鲜配制。（参考配制2 mL：K3Fe(CN)6 ：9.9 mg溶于1ml超纯水中，15.85 mg溶于1 mL超纯水中，1：1混匀）须知：每一次加10个样，加完脱色液后置白纸上观察，颜色脱去后马上加水100 uL冲洗停止反应， 2分钟内吸出，再加100ul水重复洗两次，直到完全洗掉脱色液颜色（胶变得透明），脱色后加入百分之50乙腈，放置15 min后，吸出液体。

⑵考染脱色：加入50％乙腈，37℃水浴脱色，约30 min。可以看到胶上染料基本除去，变透明。如胶上颜色残余较深，可将液体吸出，再重复一遍，直至染料脱去，胶块变透明。

4.百分之100乙腈脱水至胶块变成白色，放置，若胶块没有变白，可将乙腈吸出，再加入百分之100乙腈脱水一次。

5.加入还原剂：25 mM的NH4HCO3（含10mM DTT），封口，57℃水浴1 h。参考配制：6.2 mg DTT，溶于4 mL 25 mM的NH4HCO3。（如是2-DE胶，直接跳到第8步）

6.从水浴锅取出样品后，室温冷却，去除液体，快速加入同体积的烷基化试剂室温暗处放置30 min.

烷基化试剂：25 mM的NH4HCO3（含55 mM IAA）

参考配制方式（4 mL）：40.69mg IAA溶于4 mL 25 mM的NH4HCO3中

7.去除烷基化试剂，加入50％乙腈，放置15 min

8.加入50 mM的NH4HCO3震荡后静置吸胀5 min，再吸出。

9.先加50％乙腈脱水一遍，再用100％乙腈脱水至胶块变成白色。

10.每管加入适量的酶液（约2-3 μL），冰上放置30 min，直至胶块吸涨酶液。

酶液配制：2 μg Trypsin加入预冷覆盖液150 μL

覆盖液配制（2 mL）：100％乙腈200 μL，100 mM的NH4HCO 30.5 mL，超纯水1.3 mL

须知：酶从冰箱取出后全部操作过程，涵盖样品加酶后，都要放到冰上。

11.检查酶液吸胀情况，多余的酶液吸走，酶液不够，即胶块中仍有白色，则加入适量酶液。

12.加覆盖液20 uL封口，37℃保温16-18小时。

13.萃取

（1）将样品从37度水浴锅中取出后，超声5 min，10000 g/1 min.

（2）将上清转移到新的200 μL的EP管中。

（3）在剩下胶块中加入萃取液（百分之100乙腈+2.5%TFA用于SDS胶条，2.5 % TFA，67% CAN用于MALDI，5% Formic Acid 67% ACN用于ESI；百分之90乙腈+2.5%TFA 用于2D胶），37%保温30 min，超声，合并。

萃取液参考配制3 mL：75 μLTFA、2010 μL 100％乙腈、915 μL超纯水。

（4）超声15 min，间隔5 min，重复超声15 min。水温不能超出40度。

（5）10000g/1 min，合并上清。

14.冷冻离心干燥

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