什么是考马斯亮蓝法（Bradford法），考马斯亮蓝染色与western

bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利原因主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

考马斯亮蓝G-250（CoomassiebrilliantblueG-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1000μg／mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。 考马斯亮蓝有G250和R250两种。这当中考马斯亮蓝G250因为与蛋白质的结合反应十分快速，经常会用到来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是，可以被洗脱下去，故此，可以用来对电泳条带染色。 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程 该方式用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超越0．2％影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。 1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m195％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。 2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽可能使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，比如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。假设待测样本是未知的，也可以用抗体作为标准蛋白。一般在20ug—150ug／100ul当中绘制标准曲线。 3．将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液一样(好用PBS)。 4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如产生沉淀，过滤除去。 5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不可以超越30min． 6．按照标准曲线计算待测样本的浓度。

蛋白胶用考马斯亮蓝法大多数情况下染半可钟持续时间半年以上不掉色

考马斯亮蓝脱色液是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。脱色1小时可以观察到蛋白条带；为观察到清晰的蛋白条带则需脱色更长时间

考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue）一定范围内与蛋白质浓度成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。这当中考马斯亮蓝G-250因为与蛋白质的结合反应十分快速，经常会用到来作为蛋白质含量的测定。

考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是，可以被洗脱下去，故此，可以用来对电泳条带染色。

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

　　考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：　　

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；　　

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。　　

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。　　考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。