folin酚法与考马斯亮蓝法和紫外吸收法,考马斯亮蓝法的缺点是什么

folin酚法与考马斯亮蓝法和紫外吸收法的优缺点?
1.蛋白质测定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范围为5~100μg蛋白质,灵敏度高;但操作要费较长时间,且Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸导致,因为这个原因样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用;不一样蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不一样而使显色强度也稍有不一样。 紫外吸收法测蛋白质含量快速、简单方便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。
但该法的缺点是:
(1)针对测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异很大的蛋白质,有一定的误差。故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
(2)若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质,出现很大干扰。
什么是考马斯亮蓝法(Bradford法)?
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色,用分光光度计在吸光度595nm处读数,通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线,再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利原因主要是特殊蛋白的结构,缓冲液组分中有干扰试剂等。
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