folin酚法与考马斯亮蓝法和紫外吸收法,考马斯亮蓝法测定范围

folin酚法与考马斯亮蓝法和紫外吸收法的优缺点?
1.蛋白质测定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范围为5~100μg蛋白质,灵敏度高;但操作要费较长时间,且Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨氨酸导致,因为这个原因样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用;不一样蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不一样而使显色强度也稍有不一样。 紫外吸收法测蛋白质含量快速、简单方便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。
但该法的缺点是:
(1)针对测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异很大的蛋白质,有一定的误差。故该法适于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
(2)若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质,出现很大干扰。
考马斯亮蓝法测定特点?
考马斯亮蓝显色法测定植物蛋白质含量,显色反应灵敏,大吸收波长是595nm,而考马斯亮蓝的大吸收波长是488nm,不干扰测定结果。
考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量时,如何不要测定中产生误差,不要样品的OD值低于空白对照的情况出现?
考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较经常会用到的方式,误差可尽可能减到小,需注意:测定OD值前,将分光光度计早一点预热至少30分钟,可保证准确性;配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用;盐离子不影响实验结果,但去污剂,如TRITONX-100,SDS等,会严重干扰实验结果。
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