考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方，考马斯亮蓝法原理

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式有哪些优点？

　　考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：　　

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；　　

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。　　

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。　　考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝法如何选择高浓度或低浓度？

考马斯亮蓝法测定的蛋白质溶液浓度不可以太高，因为蛋白质浓度高时，游离染料的含量大为减少，可能会造成标准曲线的非线性。

按照染料试剂在未与蛋白质结合以前本身为棕褐色，在465nm 下有吸收，可采取595nm 和465nm 下吸光度的比值作图，来修正游离染料的耗尽，提升标准曲线的线性和测定的精确度。

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