考马斯亮蓝反应现象，考马斯亮蓝g250法测蛋白质含量实验报告

考马斯亮蓝反应情况？

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

假设不是为了让用蒸馏水，可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应，这样制作的标准曲线会比实质上值偏高，致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式有哪些优点？

　　考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方式的优点是：　　

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速；　　

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。　　

3.该法试剂配制简单，操作简单方便快捷，反应很灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。　　考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因为这个原因可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到什么仪器？

蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，以此改变这些染料的光吸收。

在些基础上发展了蛋白质染色测定方式。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。现在广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内满足比尔定律，可以在595nm处比色测定。2—5分钟即呈大光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内都可以。该法操作简单方便快速，消耗样品量少，但不一样蛋白质当中差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

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