考马斯亮蓝显色法测定植物蛋白质含量,显色反应灵敏,大吸收波长是595nm,而考马斯亮蓝的大吸收波长是488nm,不干扰测定结果。
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色,用分光光度计在吸光度595nm处读数,通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线,再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构,缓冲液组分中有干扰试剂等。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水低要求是蒸馏水,更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制,标准曲线的制作都要用到水。
假设不是为了让用蒸馏水,可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质,会影响试剂配制的准确性,干扰实验结果。
而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应,这样制作的标准曲线会比实质上值偏高,致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。
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