westernblot实验步骤，考马斯亮蓝r250和g250 的区别

westernblot实验步骤？

Western，也叫 Western blot, Western blot blot, Western印迹法是检测蛋白质抗体的重要方式之一。

实验步骤：

1.用块称量。

2.用液氮，将组织块粉碎。

3.加入 RIPA缓冲剂(每克组织3 ml RIPA)、 PMSF (每克组织30μ l,10 mg/ml PMSF)，继续保持4℃的 Polytron (每克组织3 ml RIPA)。

4. PMSF (每克组织30μ l,10 mg/ml PMSF)，冰上孵化30分钟。

5.移入离心管，4℃大概20,000 g (15,000转)。

6.将上清作为细胞裂解液，分装-20℃保存。

7.蛋白质浓度测定采取 Bradford比色法。

8.取一样质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度)，加2×电泳加样缓冲液。

9.用开水浴3分钟。

10.上样。

11.电泳(浓缩胶20 mA，分离胶35 mA)。

12.转膜仪转膜(100 mA 40分钟)。

13.薄膜为丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色。

14.显色 Westernblot试剂盒。

15.比较记录分析。

考马斯亮蓝r250与g250的区别？

考马斯亮蓝R250 和G250在用途的区别：

1、考马斯亮蓝R250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合，染色灵敏度比氨基黑高5倍，适用于SDS电泳微量蛋白质染色。

2、考马斯亮蓝G250在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而基本上无本底色，故此，经常会用到于需重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。 考马斯亮蓝R250 和G250其他的区别： 1、参数不一样 考马斯亮蓝G250比考马斯亮蓝R-250多二个甲基。 2、染色灵敏度不一样 考马斯亮蓝R250染色灵敏度比氨基黑高5倍。 考马斯亮蓝G250染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。

配好的考马斯亮蓝溶液能放多久？

考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的常见染色或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

悸硭沽晾禛-250试剂：称取 100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml 95％乙醇中，加入85% (m/v) 的磷酸100ml，后用蒸馏水定容到1000ml。此溶液可以在常温下放置30天。

大多数情况下贮备液可以存放6个月以上，应用液不要长时间存放，但凡是产生絮状沉淀则不可用！

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