用考马斯亮蓝染蛋白胶方法，考马斯亮蓝法测定范围

用考马斯亮蓝染蛋白胶方式？

考马斯亮蓝染蛋白胶（Coomassie Brilliant Blue staining）是一种经常会用到的染色方式，用于检测蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中的分离和定量。下面这些内容就是使用考马斯亮蓝染蛋白胶的步骤：

1. 将SDS-PAGE凝胶从电泳仪中取出。

2. 将凝胶置于染色盒中，加足够的染色溶液（一般是含有考马斯亮蓝染料的缩微粒溶液）覆盖凝胶，保证凝胶完全浸泡在染色溶液中。

3. 轻轻摇动染色盒，以保证染色溶液充分进入凝胶中，使其均匀染色。有的时候，需将染色盒放入摇床上进行摇动。

4. 在室温下静置染色，一般需1-2小时，或者按照实验要求延长时间。5. 将染色溶液倒出，用去离子水轻轻冲洗凝胶，直到背景染色溶液变得清澈明亮。6. 用显微镜观察凝胶上的蛋白条带，如有需，可以拍照记录。

7. 假设需保存凝胶或进行进一步的定量分析，可以将凝胶转移到脱色溶液中，继续处理。

需要大家特别注意的是，考马斯亮蓝染蛋白胶是有毒的，需要遵循实验室的安全操作规程，并正确处置废液和废弃物。除开这点为了提升染色效果和减少背景染色，可以优化染色条件，如染色时间、染色溶液浓度等。详细的操作方式和实验条件可以按照实验室的要求和实质上情况进行调整。

马斯亮蓝染色是用考马斯亮蓝进行蛋白质染色的方式。

1 电泳结束后， 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，保证染色液可以充分覆盖凝 胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时 间。 注：详细的染色时间主要还是看凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚， 温度很低，则染色时间宜一定程度上延长。凝胶较薄，温度非常高，则染色时 间可以一定程度上缩短。一般染色至凝胶的颜色和染色液的颜色很接近， 在染色液中基本上看不清凝胶时，可以觉得已染色充分。染色2-4 个小 时或更长时间不会对后的染色效果出现不好的错误影响。

2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3 次。

3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，保证脱色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。这个时间段更改替换脱色液2-4 次，直至蓝色背景差不多都被脱去，还蛋白条带染 色效果达到预期。一般蛋白条带在脱色1-2 小时后就可以产生。

考马斯亮蓝法如何选择高浓度或低浓度？

考马斯亮蓝法测定的蛋白质溶液浓度不可以太高，因为蛋白质浓度高时，游离染料的含量大为减少，可能会造成标准曲线的非线性。

按照染料试剂在未与蛋白质结合以前本身为棕褐色，在465nm 下有吸收，可采取595nm 和465nm 下吸光度的比值作图，来修正游离染料的耗尽，提升标准曲线的线性和测定的精确度。

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