pcr计算公式是什么，pcr相对定量公式是什么

ct= -k lgx0+ b（线性方程）用这个方程可以通过ct值算出样品的开始浓度

斜率=-1/lg(1+e)

扩增效率e=1, 斜率=-3.32

扩增效率范围：百分之90-1百分之10

斜率范围：-3.1和-3.59当中

△△ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式，用于比较不一样样品当中的差别或变化比率

比如，想看a基因和b基因在某细胞系中表达量的差别，选取18s作为内参基因，就用a基因的ct值减去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值减去18s的ct值得到△ct2，然后用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表达量差别为2（-δδct）次方，当然这中计算方式是根据荧光定量的数学计算模型简化来的，平日间随便用用没什么问题，假设你的两个目标基因的扩增效率明显不同，这个计算方式是不可以用的。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。

开始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知开始拷贝数的标准品可作出标准曲线，这当中横坐标代表开始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因为这个原因，只要取得未知样品的Ct值，就可以从标准曲线上计算出该样品的开始拷贝数。

△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不一样样品当中的差别或变化比率。 Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN/lg(1+Ex)，这当中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目标基因）-Ct（内参基因）；△△CT(n)=△Ct(n)-△Ct(1)。 开始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知开始拷贝数的标准品可作出标准曲线，这当中横坐标代表开始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。

因为这个原因，只要取得未知样品的Ct值，就可以从标准曲线上计算出该样品的开始拷贝数。

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。

开始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知开始拷贝数的标准品可作出标准曲线，这当中横坐标代表开始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因为这个原因，只要取得未知样品的Ct值，就可以从标准曲线上计算出该样品的开始拷贝数。

扩展资料

传统定量PCR方式简介：

1）内参照法：在不一样的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方式合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。

在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，因为内标与靶模板的长度不一样，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。

2）竞争法：选择由突变克隆出现的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（这当中一个引物为荧光标记）。

扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可以通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，按照已知模板推算预测未知模板的开始拷贝数。

讲解一个简单方式：引物对的tm差异小/等于4，则退货温度为tm均值减4；反之则为低引物tm值减2。

做标曲才可以算出这对引物的扩增效率（其斜率），方便用pfaffl方式来进行相对定量（得到的结果相对精确一点），不然只可以默认扩增效率为2，用2^-ddCt(Livak)法来计算。

2.标准曲线是已知量的 做了标准曲线可以达到绝对定量

绝对定量和相对定量都可以做标准曲线，目标在于用已知浓度样品的量做成的标准曲线来定未知浓度样品的量。

【方式一】

这个方式适用于DVBS制式，没有认真研究过，只列出公式吧。

公式：RateInBits = SymbolRate * FECRate * ModRate * (188/204)

FEC：前向纠错，取值为1（none）, 1/2, 2/3, 3/4, 5/6, 6/7, 7/8, 8/9, 1/4, 1/3, 2/5, 5/11, 3/5, 4/5, 9/10。

Mod：QPSK: 2； 8PSK: 3。

188/204：RS（里德-所罗门码）的编码效率，即传送204个字节，这当中有用的数据为188个字节。

【方式二】

这个方式适用于DVBT, DVBS, DVBS2制式，按照PCR来计算。参考【ISO/IEC 13818-1 Information technology-Generic coding of moving pictures and associated audio information: Systems.】

Page10-11 给出了计算公式：

TransportRateInBits = 2个PCR间隔的包个数 * 188 * 8* 系统时钟频率27000000 / 2个PCR的差值。

PCR=PCR_Base * 300 + PRC_Ext

PCR_Base是以系统时钟频率的1/300为单位的。

Page18：Transport packet结构。

Page22：Adaptation field结构。

步骤描述：

1. 从ts文件中每一次读取188字节（TS包的长度）。

找到启动字节sync byte 0x47，如何确定这个0x47就是sync byte而不是数据中碰巧产生的呢？查看下一个188字节的启动是不是0x47，假设是，完全就能够觉得首次找到的sync byte是ts包的启动。

在找寻PCR计算的途中，每一次都是读取188个字节。

假设不是以sync byte启动，可能流数据corrupted了，要重新找sync byte，重复这个过程。

2. 找Adaptation field，继而查看PCR flag是不是为1，找到PCR_Base 和 PCR_Ext，记录此包的PID值。找到第一个PCR0。

UINT64 t = ((tsBuf[6] 24) +(tsBuf[7] 16) + (tsBuf[8] 8) + tsBuf[9]) 0xFFFFFFFF；

UINT64 pcr_base = (t 1) + ((tsBuf[10] 0x80) 7)；

UINT64 pcr_ext = ((tsBuf[10] 0x01) 8) + tsBuf[11]；

UINT64 pcr = pcr_base * 300 + pcr_ext；

3. 记录两个PCR当中的包的个数。找下一个具有一样PID值的TS包的PCR值，PCR1。

4. 用公式计算。

假设你的模板序列已知，直接将引物序列和模板进行匹配，两条引物当中的DNA片段长度即为目标PCR产物的大小；

假设你是想清楚PCR仪反应后的产物大小，可以跑琼脂糖凝聚电泳，照胶仪下按照Marker的指示条带读取产物的大小，或者可以用照胶仪自带的软件直接读出全部pcr产物条带的大小 去Pubmed的primer-blast中blast一下，把你合成的引物序列输进去完全就能够查到了

好的办法是找到你的基因序列，然后用生物软件来判断你所找到的引物的退火温度 gc含量等参数 当然还可以看看你找到的引物能不能真的与你的基因配对，因为有的文献上的引物是错的！ 片段大小更是可以直接读出

pcr产物大小不用计算是由引物决定的，pcr产物片段就是上下游引物当中的那段dna片段碱基，但凡是引物确定了，pcr片段大小也就确定了。

两个都是通过标准曲线法计算扩增效率，实际上差不多的，根据定义理解，完全扩增，1条变2条，2条变4条，扩增效率200％，但大多数情况下通过软件计算都是提供第一种方式（用的非常多），扩增效率大为100％。实质上两者是一样的。