聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的异同,聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝

聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的异同?
DNA电泳大多数情况下使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。 聚丙烯酰氨(PAGE)凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离。电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所带上的负电荷。蛋白质电泳(大多数情况下指SDS-PAGE)按照蛋白分子量亚基的不一样而分离蛋白。蛋白质亚基的电泳迁移率主要主要还是看亚基分子量的大小,电荷原因可以小看。 故此,一样点就是样品都是带负电荷的,从负极向正极移动,移动的距离都和样品的分子量相关。
而且,这两个电泳体系可以相互交换使用。
进行大分子蛋白质电泳时,可以考虑换用琼脂糖凝胶,因为该体系孔径大。
相反,假设需精确到广大数碱基的DNA电泳也可使用聚丙烯酰胺凝胶系统,因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA链分开。 不一样点第一是样品不一样。这个就不需要多说了。
其次是结果的观察方式不一样。DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察;而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还要有经过脱色步骤,不过观察起来比较简单。还有就是胶体系的差别,DNA电泳一般是一胶跑究竟,而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。 电泳中样品移动的实质确实是样品所带上的电荷。但是区分这些条带直接可以用分子量而不需要使用电荷数是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。
以DNA分子作为例子,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所带上的负电荷来达到的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都拥有的,故此,DNA分子所带上的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。
而且DNA分子中核苷酸的组成动不动成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸当中分子量的差别就显得毫无意义。
这样,DNA分子中负电荷的量完全就能够用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也完全就能够用DNA分子所带上的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。
这在蛋白电泳中(非常是SDS-PAGE中)差不多的。
在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,让其所带上的电荷与蛋白分子量成一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了。 至于为什么核酸的横着跑,蛋白竖着跑,个人觉得大的问题是蛋白制胶的过程致使的。
蛋白制胶因为使用了两种不一样的凝胶系统,故此,需一个水平的分界面。
这个分界面在配胶的途中是依靠异丙醇在重力作用下的压力下形成的。故此一并就竖着跑了~~
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