考马斯亮蓝法如何选择高浓度或低浓度，蛋白质考马斯亮蓝法

考马斯亮蓝法测定的蛋白质溶液浓度不可以太高，因为蛋白质浓度高时，游离染料的含量大为减少，可能会造成标准曲线的非线性。

按照染料试剂在未与蛋白质结合以前本身为棕褐色，在465nm 下有吸收，可采取595nm 和465nm 下吸光度的比值作图，来修正游离染料的耗尽，提升标准曲线的线性和测定的精确度。

在酸性的反应条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，致使大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以按照标准曲线而确定。

故此，考马斯亮蓝法测定蛋白质的条件是在酸性条件下。

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

假设不是为了让用蒸馏水，可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应，这样制作的标准曲线会比实质上值偏高，致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。