考马斯亮蓝法如何选择高浓度或低浓度，考马斯亮蓝反应现象解释

考马斯亮蓝法测定的蛋白质溶液浓度不可以太高，因为蛋白质浓度高时，游离染料的含量大为减少，可能会造成标准曲线的非线性。

按照染料试剂在未与蛋白质结合以前本身为棕褐色，在465nm 下有吸收，可采取595nm 和465nm 下吸光度的比值作图，来修正游离染料的耗尽，提升标准曲线的线性和测定的精确度。

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

假设不是为了让用蒸馏水，可能水里面会有一部分游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝出现变色反应，这样制作的标准曲线会比实质上值偏高，致使后浓度检测的结果比实质上结果偏低。

蛋白质它可以跟不少试剂出现颜色的反应．比如在鸡蛋白溶液中滴入一滴的浓硝酸,则鸡蛋白溶液会呈黄色的，这个原理是因为蛋白质（含苯环结构）与浓硝酸出现了颜色反应.并且它还可以用双缩脲试剂对其进行检验,该试剂遇蛋白质变紫的。

经常会用到的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

这当中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现在将其与其他的蛋白质染色方式(主要是银染法)作一比较，帮各位考生更好地去选择适合的蛋白质染色方式。

蛋白质的染色经常会用到的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

这当中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliant blue，CBB)为代表，在蛋白质分析中经常会用到，但对低丰度蛋白质的显现较差；银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容；荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱，但因为需配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常见方式使用；而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。

因为这个原因，筛选简单方便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。

因为考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近几年来就考马斯亮蓝染色法在提升其灵敏性方面研究者们作了不少改进，方式很多，评价不一。

我们在作双向凝胶电泳时，将经常会用到的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响原因作出分析。……具体资料请参考：on http://www.bio1000.com/experiment/protein/351913.html

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

R250不可以用来测蛋白质浓度的，G250用来测蛋白质浓度100mg考马斯亮蓝G-250溶于50 ml 95%乙醇，加入100 ml磷酸然后补加水至1 L，Whatman1号滤纸过滤。