考马斯亮兰R250液体怎么配置测蛋白质浓，考马斯亮蓝有毒吗?致癌吗

考马斯亮兰R250液体，怎么配置测蛋白质浓度？

R250不可以用来测蛋白质浓度的，G250用来测蛋白质浓度100mg考马斯亮蓝G-250溶于50 ml 95%乙醇，加入100 ml磷酸然后补加水至1 L，Whatman1号滤纸过滤。

考马斯亮蓝有毒吗？

有毒。

考马斯亮蓝属于三苯甲烷类染料,可与蛋白质形成很强的非共价复合体.考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量成正比。

有

考马斯亮蓝为一种三苯甲烷类染料，可与蛋白质通过范德华力作用形成很强的非共价复合体。考马斯亮蓝染色法以非常高的重复性和灵敏度还有很好的质谱兼容性，成为现在一种使用较为广泛的蛋白质染色方式，其在一定范围内和蛋白浓度呈正比，因为这个原因也用于蛋白定量检测

lowry法是什么？

Lowry 法指的是在双缩脲法的基础上通过添加福林一酚试剂来增多蛋白质的分析灵敏度，可以适用于双缩脲法没办法测定的低蛋白含量样品。此反应中，福林酚试剂被蛋白质中的酪氨酸残基还原，形成的蓝色化合物在750 nm、405 nm 附近有大吸收。

其原理是蛋白质与碱性铜溶液中的铜离子络合，让肽键伸展，以此使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，出现蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，因为各自不同的蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不一样，因为这个原因在测定时需使用同种蛋白质作标准。

　　bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。　　bradford法，也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者大光吸收在 465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0～100μg/ml)，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡，完成反应十分快速，其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应很灵敏，可测微克级蛋白质含量，故此，是一种很好的蛋白质定量法。　　Lowry法是双缩脲法和福林酚法的结合与发展，其原理是：蛋白质溶液用碱性铜溶液处理，形成铜-蛋白质的络合盐，再加入酚试剂后，除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外，还使双缩脲法中肽键、碱性铜的显色效果更强烈。因为这个原因，Lowry法的显色效果比独自使用酚试剂强烈3～15倍，为双缩脲法100 倍。因为肽键显色效果提高，以此减小了因蛋白质种类导致的偏差。Lowry法的试剂由2个部分组成，试剂甲基本上等同于双缩脲试剂(碱性铜溶液)，可与蛋白质中的肽键起显色反应；试剂乙为磷钨酸和磷钼酸混合液，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物而呈蓝色反应，因为这个原因蛋白质的酪氨酸和胱氨酸等可显色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。

500毫升考马斯亮蓝怎么配？

考马斯亮蓝G250的配制：称取100mg考马斯亮蓝G一250，溶于50ml90％乙醇中，加入85％的磷酸100ml，后用蒸馏水定容到1000ml。此溶液在常温下可放置30天。

考马斯亮蓝100ml：取10mgG一250，溶于5ml的95％乙醇中，这个时候溶液为蓝色，再加入了10ml的85％的磷酸，溶液为血红色，可是加水定容到100ml时又成为了蓝色。

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考马斯亮蓝法与蛋白反应条件？

在酸性的反应条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，致使大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以按照标准曲线而确定。

故此，考马斯亮蓝法测定蛋白质的条件是在酸性条件下。

怎样配制考马斯亮蓝G250蛋白染色剂？

考马斯亮蓝G-250的配制：

1.称取100 mg考马斯亮蓝G-250，溶于50 mL 百分之90乙醇中，

2.加入85%的磷酸100 mL，

3.后用蒸馏水定容到1 000 mL。 此溶液在常温下可放置30天。

考马斯亮蓝洗脱液配方？

0.25% 考马斯亮蓝R-250 ：100ml

甲醇： 45ml

蒸馏水： 45ml

冰乙酸： 10ml

考马斯： 0.25g

考马斯亮蓝脱色液：1L

乙醇： 50ml

冰乙酸： 100ml

蒸馏水： 850m

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