分光光度计原理:
分光光度计采取一个可以出现多个波长的光源,通过系列分光装置,以此出现特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,以此转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计组成:主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
分光光度定义:
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。
经常会用到的波长范围:
(1)200~400nm的紫外光区
(2)400~760nm的可见光区
(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm-1~400cm-1)的红外光区
所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,全部仪器应根据国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
分光光度计的重要配件- 比色杯
比色杯根据材质总体分为石英杯、玻璃杯还有塑料杯。按照不一样的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。大多数情况下测试核酸和紫外定量蛋白,均采取石英杯或者玻璃杯,但是,不合适比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,故此,一定要采取一次性的塑料杯。而塑料杯大多数情况下不合适用于在紫外范围内测试样品。
分光光度计操作方式:
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较)。
3.按照所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的t=100,指针稳定后一步一步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色结束,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
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