血球计数板计算公式，细胞计数板计算公式为什么乘10000

血球计数板由25个大方格(面积为1/25 mm.)所组成，这当中包含400个小方格(面积为1/400 mm.)；而血球计数板的深度为0.1m.m.，因为这个原因每个大方格之容积为0.004mm2；每个小方格之容积为0.00025mm2。若算出来加总的数值为E，则换算为1ML.之菌量公式为 (E/5)*(1/0.004)*1000*稀释倍数 =(E/5)*25*105*稀释倍数

血细胞计数板的计算方式是：1、视待测菌悬液浓度，加无菌水一定程度上稀释，以每小格的菌数可数为度。2、取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。3、将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴，让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡出现，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。4、静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不可以再随液体漂移。5、计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格的菌数。6、针对出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，就可以作为两个菌体计算。

每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片当中的高度为0.1㎜，故此，计数室的容积为0.1㎜3。其计算方式请看下方具体内容：

16×25的计数板计算公式：

细胞数 ml=(100小格内的细胞数 100)×400×1000×稀释倍数

25×16的计数板计算公式：

细胞数 ml=(80小格内的细胞数 80)×400×1000×稀释倍数

当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，就可以换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

详细操作：

1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板当中，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不可以让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：

细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml

(注：当细胞不少时，可以在四个格中选一定数目较平均的小格，因为每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，得出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。故此细胞密度=m×16×10个/ml)

说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为：

1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm

而 1ml=1000ul=1000mm

（注意：镜下偶尔会有有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团百分之10以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。）

微生物计数的方式主要有两大类，一类是非培养的原位计数法，一类是培养后的计数法。

非培养的原位计数法，将一定程度上稀释的菌悬液滴在细胞计数板上(2微升，需体积准确)，在显微镜下，通过显微镜观察计数板每个小格子里的细胞数量，统计出计数板上全部的细胞量。再按照稀释倍数和液滴的体积计算出原样品中1毫升中含有多少细菌细胞。

细菌细胞培养后计数方式有两种，一种是固体培养法(CFU)，另一种是液体培养法(MPN)。

CFU法是梯度稀释培养法，将样品进行10倍的梯度稀释，一般环境样品稀释至10的-8次幂，细胞很好的分散度。两全部的稀释样品取100微升均匀涂布在预制好的固体培养基平板上(2-3个平行)，然后置于一定程度上的温度(大多数情况下是25-30°)培养过夜，观察全部的平板菌落生长情况，分散均匀的基本就是一个菌落就是一个细胞形成的，计数菌落就是样品中的细胞数量，计数平板选择生长数量在100个菌落左右的平板比较准确。将平板菌落数×稀释倍数就得到原环境细胞数量。

MPN是细胞绝迹稀释法，将样品进行10倍的梯度稀释，稀释程度一定程度上增多3-5个梯度，即大多数情况下稀释至10的-10至-12次幂。将每个稀释液分别取100微升转接入3个平行的液体培养基(3-5毫升)中，置于一定程度上温度(大多数情况下25-30°)，过夜培养。观察全部的稀释培养试管，记录绝迹生长后三个稀释度的情况，查MPN统计表，将查表数值×稀释梯度，取得原样品细菌细胞数量。

后说明，非培养的计数方式是包含活细胞和死细胞的都细胞的计数方式，而培养的计数方式，则是活细胞的计数方式。这当中CPU法比MPN法准确，MPN法具有更多的有现场操作的便捷性，各有优缺点，按照需灵魂选择。

微生物计数方式：

血细胞计数法

将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并得出每个小格所含细菌的平均数，再从而为依据，估算总菌数。

（1）此法的缺点是不可以区分死菌和活菌。

（2）对压在小方格界线上的细菌，需要取平均值计数。

（3）此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化

稀释涂布平板法

每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源自于样品稀释液中的一个活菌.

（1）这一方式经常会用到来统计样品中活菌的数目

（2）统计的菌落数时常比活菌的实质上数目低,因素是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因为这个原因统计结果大多数情况下用菌落数而不是用活菌数来表示.

（3）土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量都可以用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,比如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.

（4）此法若不培养成菌落,可以通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.

滤膜法

滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经过处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数.

此法也可通过培养观察形成的菌落数来推测预计样品中的菌数.比如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可按照培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.

此法也是统计样品中活菌的数目.

比浊法

在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因为这个原因可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,不然不准确.

显微镜直接计数法

在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上面说的活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的经常会用到方式.”这里说的显微镜直接计数,我觉得肯定是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方式在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.

另外,微生物计数法发展快速,各种多样的迅速、简易、自动化的仪器和装置等方式可以用来统计微生物的数目

微生物计数：

病毒以外的微生物的计数。样品中可测到总的(死的和活的)细胞数，称为总细胞数，样品中可测到的活的细胞数称活细胞数。

总细胞数可用电子仪器或直接计数法测定。含有低细胞浓度的液体样品。可以用膜过滤并在膜上对细胞染色，在显微镜下计数活细胞数的侧定。可由:(1)在计数室内测定用活体染色剂染色的样品，(2)稀释平板法，(3)菌落计数，样品中活细胞数目由接种了样品的，发育在合适培养基上的菌落数目推定。培养基和(或)培养条件的选择，可以非常大地影响形成菌落的活细胞数。某些类型的细胞，趋向于丛生或链生，这些微生物的准确的活细胞计数不可以用上面说的方式，可依据“单位体积菌落形成单位，(cotony-formingunit/ valwne)来计数。 上面说的方式，大多数情况下适用于大多数细菌和泡子计数，这当中一部分方式，’可用于某些藻类、真菌和原生动物。在显微镜下，计数快速运动的原生动物，可以用粘性悬浮培养基，如2-5I甲基纤维素。降低它们的运动逮度。

25格x16格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10000×稀释倍数，含义:五点取样法调查5个中格共含80个小格中酵母菌数，求平均值，得每个小格酵母菌数，再乘400得血细胞板小坑中总酵母菌数，再除以小坑体积0.0001mL得每酵母菌种群密度，再乘以检测前稀释倍数，即得结果。

不可以，稍微小点的细菌用血球板计数就不准。血球计数板在显微镜下直接进公务员行政职业能力测验定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推测预计出含菌数，简单方便快捷。但是，在计数时涵盖死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内