凯氏定氮计算公式，凯氏定氮法蛋白质计算公式

凯氏测定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现目前已经发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法还有自动定氮仪法等是分析有机化合物含氮量的经常会用到方式。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量一般占其总质量的16%左右(12%~一19%),因为这个原因，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质)，计算公式: 蛋白质含量=含氮量/16%

(V1-V2)*C*0.0140*6.25/m 这当中V1是滴定时消耗盐酸的量（毫升），V2是空白实验所消耗的盐酸量（毫升），C是盐酸标准液浓度（摩尔/升），m是样品质量（克）， 6.25为氮换算为蛋白质的平均系数

(NH4)2SO4+2NaOH 高温蒸气 Na2SO4+2H2O+2NH3↑

NH3+H3BO3→NH4H2BO3

凯氏定氮法通过测氮应用经验公式计算粗蛋白质含量，不可以将无机氮算作有机氮。

优点：

1、可用于全部食品的蛋白质分析中。

2、操作相对比较简单。

3、实验费用很低。

4、结果准确是一种测定蛋白质的经典方式。

5、用微量凯氏定氮法可测定样品中微量的蛋白质。

缺点：

1、后测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮。

2、实验时间太长，至少需2小时才可以完成。

3、精度差，精度低于双缩脲法。

二、凯氏定氮法须知

1、样品应是均匀的，固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。

2、样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上，万一沾附可用少量水冲下，避免被检样消化不完全,结果偏低。

3、硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入百分之三十过氧化氢2到3毫升，促使氧化。

4、在整个消化途中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，避免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失。

凯氏定氮法是分析有机化合物含氮量的经常会用到方式。也就是在有催化剂的条件下，用浓硫将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，计算出样品中的氮量。

第一将待测物中的氨在加强热及硫酸铜催化，浓硫酸作用下，生成硫酸铵。此过程后溶液需呈蓝绿色澄清透明溶液。

第2个步骤是在溶液中加入氢氧化钠，通过蒸馏释放出氨，收集于硼酸溶液中。硼酸溶液中早一点加入甲基红-溴甲酚绿指示剂，可以观察到溶液由暗红色变为绿色。

后用已知浓度的盐酸或硫酸标准溶液滴定，按照标准酸溶液的消耗量计算出氮的含量。滴定途中，溶液颜色由绿色变为灰绿色为终点。

蓝色沉淀在加热的情况下会分解成黑色的氧化铜沉淀

由紫红色-绿色-灰色

这是按样品的量来区分的：

常量分析：固体样品一克以上，液体和气体样品一毫升以上；

微量分析：固体样品一毫克以下，液体和气体样品一微升以下；

半微量分析：固体样品一毫克到一克，液体和气体样品一微升到一毫升；

奶制品中的蛋白质含量的测定方式分为两大类:

一类是利用蛋白质的共性,即含氮量,肽链和紫外吸收测定蛋白质含量；

另一类是利用蛋白质中的特定氨基酸残基还有酸、碱性基团和芳香基团测定蛋白质含量。

因为食品种类不少,食品中蛋白质含量又各不一样,非常是其他成分,如碳水化合物,脂肪和维生素的干扰成分不少。而凯氏定氮法因其通用性强,测定费用低,仪器简单,且比较准确。因为这个原因经常会用到凯氏定氮法来测定食品中的氮含量,再由氮含量计算出蛋白质的含量。

现在我们国内食品中蛋白质含量测定的国家标准就是通过凯氏定氮法来测定的。在检验食品中蛋白质时,时常限于测定总氮量,然后乘以氮换算为蛋白质的系数，得到蛋白质含量,其实这样测定的蛋白质含量涵盖核酸生物碱、含氮类脂、卟啉和含氮色素等非蛋白质含氮化合物,故称为粗蛋白质。

凯氏定氮法其实测的不是蛋白质含量,而是通过测氮含量来推测预计蛋白质的含量。不法商人就是利用了这一点,通过向奶制品中加入高含氮量的有机化合物三聚氰胺来提升其产品的“蛋白”含量的。

在正常情况下,针对食品,非常是奶制品中蛋白质含量测定,这个测定方式是没有问题的,因为食品,非常是奶制品中的主要成分中唯有蛋白质含有氮,其他主要成分脂肪还有碳水化合物都不含氮。因为这个原因,应该说现在食品中蛋白质含量测定的国家标准采取凯氏定氮法,通过测定食品中总含氮量来计算蛋白质含量的方式在理论上并没有错。

但是，,假设有人往样品中加入高含氮的其他物质,如三聚氰胺,完全就能够骗过凯氏定氮法取得虚假的蛋白质高含量。这样,完全就能够通过向原奶中兑水,把水当作牛奶来卖；向奶粉中添加淀粉等,将淀粉等当作奶粉,甚至婴幼儿配方奶粉来出售。面对这一问题,仅通过建立食品、非常是乳制品中三聚氰胺的检测方式是不够的,因为不法分子为了商业利益可能还会“研发”其他高含氮化合物作为新的“蛋白精”来替代受到高度特别要注意关注的三聚氰胺。