考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定,考马斯亮蓝怎么处理

考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定?
用考马斯亮蓝法时,稀释蛋白的倍数主要主要还是看标准曲线的情况。 例如用BSA作标准曲线,第一个点加入0.02mg/ml的BSA,其后依次增多为0.04、0.06、0.08、0.1mg/ml。既然如此那,需测定的蛋白质还要稀释到浓度在0.02~0.1mg/ml当中。
考马斯亮蓝怎么去除?
处理方式:
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合,反应迅速,并且稳定,没办法用普通试剂洗掉。待一两周左右,皮屑细胞自然衰老脱落就可以无碍。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右时间内达到平衡,完成反应十分快速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简单方便快捷,反应很灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL是一种经常会用到的微量蛋白质迅速测定方式。
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。这当中考马斯亮蓝G-250因为与蛋白质的结合反应十分快速,经常会用到来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是,可以被洗脱下去,故此,可以用来对电泳条带染色。
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